由于該菌可生長在放線菌 A45 平板中，暫認為該菌與放線菌 A45 需相同的生活環境。對于在實驗中發現的新菌種，如能及時采取對其的純化培養和確認，可能會對以后的實驗及研發帶來有利影響。但該實驗現停留在實驗室基礎研究層面，還需進一步進行 PCR 測序實驗，確定該菌真實身份。
1 儀器
精密電子天平（型號：PB203-N，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；4℃冰箱（BCD-205E/Y，海爾集團）；蘇泊爾微電磁爐 （型號：C19A01-A，浙江蘇泊爾股份有限公司）；智能生化培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；振蕩培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌器（型號：LDZX-50KBS
，上海申安醫療器械廠）；電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG-9240A，上海精宏實驗設備有限公司）；無菌操作臺（型號：JB-VS-840U，蘇州佳寶凈化工程設備有限公司）；精密試紙（pH 6.4-8.0，上海三愛思試劑有限公司）；可調微量鎖緊移液器（型號：WKYⅣ-5，上海佳音分析儀器廠）；燒杯（50mL、100mL、500mL、1000mL 和2000mL）；量筒（50mL、100mL、250mL 和 1000mL）；錐形瓶（100mL、250mL 和 500mL）；分液漏斗（250mL）；10mL 移液管；紗布；微量移液器和槍頭（20μL，200μL 和 1000μL）；接種環；酒精燈；脫脂酒精棉；培養皿；玻璃棒。
2 實驗方法
2.1 未知菌株的發現
無菌條件下，培養本實驗室保存的放線菌 A45，從中挑取未知菌種進行分離純化培養，挑取純化的單個菌落，點在密集劃線的正常放線菌 A45 平板上，放培養箱 28℃倒置培養 48h 觀察。
2.2 未知菌株的發酵培養
無菌條件下，挑取未知菌株單個菌落接種于高氏一號培養液，置于振蕩培養箱內以 200r/min 28℃振蕩培養 4d。待大部分孢子成熟后，即可用于發酵培養。按照 8%（20mL）的接菌量接種于新的高氏一號培養液中，置于振蕩培養箱內以 200r/min 28℃振蕩培養 4d。
2.3 抑菌活性物質的萃取濃縮
將澄清的發酵液用有機溶劑進行萃取。加入 1/4 體積的有機溶劑，充分攪拌后靜置 4h，收集有機相和水相，用濾紙片法檢測各相萃取液的抑菌活性，將有活性相萃取三次后分別合并。將合并相于 70℃下旋轉蒸發濃縮，4℃保存備用。
2.4 活性物質的抑菌實驗
2.4.1 濾紙片法
無菌條件下，用無菌鑷子夾取直徑為 5mm 的圓形無菌濾紙片分別放入需檢測的溶液中，充分浸泡，2h 后取出無菌風干，備用。將活化好的供試菌株密集劃線接種于無菌平板上，用鑷子夾取風干的濾紙片放在接種的平板上。放入培養箱。37℃倒置培養 24h，觀察結果。
2.4.2 微量肉湯稀釋法
無菌操作，將制備的濃度相當于 0.5 麥氏比濁標準的菌懸液，經肉湯 1∶1000 稀釋后分別加到無菌 96 孔聚苯乙烯板中的第 1-11 孔，每孔中加 180μl。將不同濃度梯度的粗提物溶液分別加到上述 1-10 孔中，每孔 20μl，第11 孔不加粗提物作為生長對照。使第 1-11 孔最終粗 提 物 濃 度 分 別 為 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0mg/ml，將 96 孔板密封后置 35℃普通空氣孵育箱中，孵育 24h，用酶標儀在 630nm 處檢查吸光度值，記錄實驗數據。
3 討論
本實驗通過濾紙片法對未知菌株發酵液中有效成分進行抑菌效果測定，結果發現該菌株發酵液中的有效成分對多種菌種均有較強的抑制作用，抗菌譜較廣，對表皮葡萄球菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌效果較好，其中傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌和痢疾桿菌吸光度上升幅度趨于一致，說明該物質對這三種菌的作用效果相同；表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌雖在8mg/mL 時所測的吸光度值開始上升且幅度大致相同，但當粗提物濃度降到 4mg/mL 時，吸光度走向偏差增大，可能原因為金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽性菌而表皮葡萄球菌是革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌耐受更強。對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑菌效果為 16mg/mL，但枯草吸光度上升的幅度比大腸桿菌大，說明枯草芽孢桿菌對抑菌成分的耐受高于大腸桿菌，猜測這可能與它細胞壁的結構及芽孢有關。但同為革蘭氏陽性菌的金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌，檢測的吸光度值差距明顯，我們猜測芽孢很可能起到了至關重要的作用。
綜上所述，未知菌株分泌的活性物質有較強的廣譜抑菌作用，且乙酸乙酯能有效萃取活性物質。但該菌的真實面目需進一步確實。
